96孔细胞培养板的使用面积是多少
tnf测定是什么意思？
tnf测定是什么意思？
TNF的主要生物学功能是对某些肿瘤细胞具有细胞毒作用。常用于TNF检测的敏感细胞系为L929细胞，基本方法如下：收集处于对数生长期的L929细胞，经洗涤、计数后调节到适宜浓度，加入至96细胞培养板中，37℃、5%CO2培养16~24小时，换液后在各孔内加入不同稀释浓度的待检样本，再加入适量的放线菌素D和培养液，继续培养16小时左右，加入100μl MTT，培养6小时后，轻轻吸去上清，加入酸化异丙醇，再在570nm波长下测定光密度，其光密度值与TNF细胞毒功能成反比，据此推测样本中TNF含量。
5%结晶紫怎么配？
在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。
96孔板怎么洗干净？
96孔板可以酸或者酒精洗干净。
如果是新配制的酸泡2到3个小时，旧酸则多泡2-3个小时，这些板一般可以重复使用4-5次注意：泡酸的时候不要用新配制好的强酸洗液，因为太强的酸可以腐蚀掉板底部的那层促进细胞贴壁的膜，造成培养的细胞难以贴壁。可以适当的稀释一些，再浸泡培养板过夜，清洗，泡于75%的酒精中（酒精要用质量高一点杂质少的酒精），用前可直接取出（或用无菌水清洗1到2次），在紫外线下照射1小时左右，即可使用。
怎样才能铺得均匀？
做细胞生物学实验，细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领，铺得不是均匀： 要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。现分享我的实验技巧。
一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入。加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下，再继续加剩余的半边板子。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘。
注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约 5 分钟，放入 37 度培养箱。
6 孔板、12 孔板或 24 孔 板，我均采用将第一个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底。然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底。其它孔一次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底。
加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多，而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。
这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有 96 孔板好掌握，效果没有 96 孔板好，所以我放弃改用浸润孔底的方法。
细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之分散。
如果实验室有平板振荡器的话，我建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，就是振幅小，频率高的那种。
细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！还有转移到六孔板后，是要晃得。晃的时候最好不要让那个细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀。
一瓶细胞长满后，正常处理，在培养瓶里吹匀。然后铺 6 孔板，每孔 2 毫升，铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭。然后放到培养箱里，轻微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。基本上 24 小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。
计算好所需要的全部液体量和细胞量，混匀后，加到六孔板里，六孔板按横 8 字型晃。显微镜下观察，如果不均匀，按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话，在种六孔板的过程中，随时晃一下混匀用的瓶子，瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。
放在水平板面上先上下移动，再左右移动，每个方向5到6次，但关键的是摇完后最好直接放入培养箱中，不要再做过多的运动，例如放到镜下去看，否则很容易就又聚到中间去了。